定量PCR儀是在定性PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的核酸定量技術(shù)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是一種在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用對(duì)熒光信號(hào)積累的實(shí)時(shí)檢測來監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。目前定量PCR儀已廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)研究和醫(yī)學(xué)研究等領(lǐng)域。
定量PCR儀的分子生物學(xué)研究：
1）基因表達(dá)研究：細(xì)胞因子是一種調(diào)節(jié)蛋白，它對(duì)免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)具有重要的調(diào)節(jié)作用，包括對(duì)淋巴細(xì)胞激活、增生、分化、存活和凋亡的調(diào)節(jié)。這些低分子蛋白由淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞所分泌，其量的改變常常與一些疾病，如炎癥反應(yīng)、自身免疫性疾病、移植排斥反應(yīng)等有密切的關(guān)系。由于所得到組織樣本常常因?yàn)樘《荒軡M足在蛋白質(zhì)水平的檢測，另外，通常用的蛋白質(zhì)檢測方法的靈敏度也難以完成對(duì)極微量的蛋白產(chǎn)物的檢測，所以應(yīng)用PCR檢測細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平就顯得很有意義。實(shí)驗(yàn)研究表明：定量結(jié)腸直腸癌淋巴結(jié)的癌抗原mRNA的表達(dá)量，可以作為診斷癌癥微轉(zhuǎn)移的重要依據(jù)。
2）單核苷酸多態(tài)性及突變分析：實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀一個(gè)誘人的應(yīng)用前景是用于檢測基因突變和基因組的不穩(wěn)定性?；蛲蛔兊臋z測基于兩條探針，一條探針橫跨突變位點(diǎn)，另一條為錨定探針，與無突變位點(diǎn)的靶序列雜交，兩條探針用兩種不同的發(fā)光基團(tuán)標(biāo)記。如靶序列中無突變，探針雜交便會(huì)降低雜交體的穩(wěn)定性，從而降低其熔解溫度。這樣便可對(duì)突變和多態(tài)性進(jìn)行分析。拉米夫定是有效治療慢性乙型肝炎的抗病毒藥物，但臨床應(yīng)用中不斷有病毒變異的報(bào)道，這些變異可能是治療失敗或病毒對(duì)治療無反應(yīng)的原因。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀可以監(jiān)測乙型肝炎患者服用拉米夫定后體內(nèi)是否產(chǎn)生耐藥突變病毒。
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