流式細(xì)胞術(shù),顧名思義,是研究細(xì)胞的一種技術(shù),但是它的研究對象不僅僅局限于真核細(xì)胞,還可以研究細(xì)菌、病毒以及各種蛋白等等。無論你是基礎(chǔ)科研工作者還是臨床醫(yī)生,都用得上這項(xiàng)技術(shù)。與之相關(guān)的儀器----
流式細(xì)胞儀。
通過流式細(xì)胞儀可分析各時(shí)期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù),來檢測細(xì)胞的增殖、凋亡。
流式細(xì)胞儀分析原理:通常用PI染細(xì)胞核,PI在一定波長的光下發(fā)出熒光,其強(qiáng)度與DNA含量成正比。綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白及其它發(fā)光基團(tuán)也可作為標(biāo)記物,分選細(xì)胞。
流式細(xì)胞儀測量方法:
1)將細(xì)胞以1×106接種于60mm培養(yǎng)板,80%匯合后轉(zhuǎn)染。
2)24小時(shí)后在新鮮培養(yǎng)液中加入適當(dāng)?shù)目股兀ㄕ婧吮磉_(dá)載體上的抗性標(biāo)記)進(jìn)行培養(yǎng)(該步可選)。
3)48-72小時(shí)后用胰酶消化收集細(xì)胞,PBS洗兩遍,棄上清,加入1ml 70%預(yù)冷乙醇中,吹打均勻,4℃固定12小時(shí)以上。
4)PBS洗滌去乙醇,1000rpm,5min,洗兩遍。
5)0.5mlPBS重懸細(xì)胞,加入PI和RNaseA至終濃度50µg/ml,37℃溫浴30 min。
6)用流式細(xì)胞儀測定周期。
PI:碘化丙啶,以PBS配成1mg/ml,4℃保存。
RNaseA:10mg/ml。