BD流式細(xì)胞儀又稱熒光激活的細(xì)胞分選器,作為進(jìn)行流式細(xì)胞分析的儀器,它集電子技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、激光技術(shù)、流體力學(xué)、圖像技術(shù)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)理論于一體,是一種非常先進(jìn)的檢測(cè)儀器,被譽(yù)為生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的“CT”。流式細(xì)胞術(shù)已經(jīng)成為一種用途廣泛和先進(jìn)的細(xì)胞分析技術(shù),在細(xì)胞生物學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、免疫學(xué)等基礎(chǔ)和臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。
細(xì)胞周期是指細(xì)胞從一次分裂完成開(kāi)始到下一次分裂結(jié)束所經(jīng)歷的全過(guò)程,細(xì)胞的遺傳物質(zhì)復(fù)制并均等地分配給兩個(gè)子細(xì)胞。細(xì)胞周期分為間期與分裂期兩個(gè)階段。間期又分為三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)與DNA合成后期(G2期)。某些細(xì)胞在分裂結(jié)束后暫時(shí)離開(kāi)細(xì)胞周期,停止細(xì)胞分裂,執(zhí)行一定生物學(xué)功能(G0期)。
由于細(xì)胞周期各時(shí)相的DNA含量不同,通常正常細(xì)胞的G1/G0期具有二倍體細(xì)胞的DNA含量(2N),而G2/M期具有四倍體細(xì)胞的DNA含量(4N),而S期的DNA含量介于二倍體和四倍體之間。PI可以與DNA結(jié)合,其熒光強(qiáng)度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量。因此,通過(guò)
BD流式細(xì)胞儀PI染色法對(duì)細(xì)胞內(nèi)DNA含量進(jìn)行檢測(cè)時(shí),可以將細(xì)胞周期各時(shí)相區(qū)分為G1/G0期,S期和G2/M期,獲得的流式直方圖對(duì)應(yīng)的各細(xì)胞周期可通過(guò)特殊軟件計(jì)算各時(shí)相的細(xì)胞百分率。
PI即碘化丙錠,可以與細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA結(jié)合。PI不能通過(guò)細(xì)胞膜完整的細(xì)胞(如活細(xì)胞和早期凋亡細(xì)胞),在標(biāo)本制備時(shí),必須先用乙醇或其他破膜劑增強(qiáng)細(xì)胞膜的通透性,才能使PI進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與細(xì)胞內(nèi)的核酸結(jié)合。乙醇通常為終濃度為70%的冷乙醇。
如果應(yīng)用于
BD流式細(xì)胞儀,采用RNA抑制劑將RNA消化后,通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到的與DNA結(jié)合的PI的熒光強(qiáng)度直接反映了細(xì)胞內(nèi)DNA含量的多少。當(dāng)然,PI也可用于作細(xì)胞核染色,作為觀察或定量細(xì)胞的方法。